最近小編經(jīng)常收到一些技術(shù)咨詢：

我們藥品微生物檢驗(yàn)使用的培養(yǎng)基怎么測定F₀值？

我們在做XLD的培養(yǎng)基滅菌時，采用煮沸當(dāng)時進(jìn)行滅菌，這種煮沸滅菌的培養(yǎng)基怎么測定F₀值呢？

生產(chǎn)廠家培養(yǎng)基滅菌的F₀值是怎么規(guī)定的呢？

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下面小編為您詳細(xì)解答培養(yǎng)基和F₀值之間的關(guān)系。

培養(yǎng)基滅菌是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、制藥生產(chǎn)、食品檢測及臨床診斷中的核心步驟，其質(zhì)量直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、產(chǎn)品的安全性以及數(shù)據(jù)的可靠性。使用未徹底滅菌的培養(yǎng)基可能造成嚴(yán)重的后果，例如在藥品無菌檢查過程中，使用未徹底滅菌的培養(yǎng)基，可能會誤判藥品受到污染，嚴(yán)重時會導(dǎo)致批次報(bào)廢或召回；其次未徹底滅菌的培養(yǎng)基中含有的某些雜菌可能會競爭營養(yǎng)或分泌某些成分，影響目標(biāo)微生物的檢出，但一提到滅菌檢驗(yàn)效果首先想到的就是測定F₀值。

首先了解兩個比較重要的概念: F₀值和過度殺滅程序。

F₀值：即標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間，是指滅菌過程賦予被滅菌物品121℃下的等效滅菌時間；

過度殺滅程序 （Overkilled Approach）：一個對產(chǎn)品生物負(fù)荷信息要求很低的滅菌程序，即用一個假設(shè)的最差的狀況來確定被滅菌品非無菌概率小于10^-6的程序，即要求F₀值均大于12min的程序 [來源于《濕熱滅菌工藝指南》（2008版）]。

歐盟針對液體產(chǎn)品滅菌選擇決策樹（圖1）和《中國藥典》要求，具有不穩(wěn)定成分的產(chǎn)品使用濕熱滅菌可采用殘存概率法F₀≥8min的程序。過度殺滅法以殺滅微生物作為實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品無菌的手段，對整個工藝控制要求較低，而F₀≥8min的殘存概率法的工藝，不是依賴最終滅菌法消除微生物污染，需結(jié)合生產(chǎn)工藝流程的嚴(yán)格控制以保證產(chǎn)品的無菌度。

圖1：歐盟液體產(chǎn)品滅菌選擇決策樹

接下來我們就要知道培養(yǎng)基的滅菌條件與F₀值之間是如何換算的？

如滅菌條件為121℃ 15min，無需進(jìn)行計(jì)算可知其F₀≥15min，該滅菌條件設(shè)定屬于進(jìn)行了過度殺滅程序。如滅菌條件為121℃ 5min，F(xiàn)₀值需要經(jīng)過測定相應(yīng)溫度經(jīng)歷的時間并經(jīng)過一定換算得到，升降溫階段的貢獻(xiàn)可通過積分L值計(jì)入F₀值，如下表所示。

從100℃升溫用時5min，降溫用時5min，保溫5min，通過L值轉(zhuǎn)換計(jì)算該培養(yǎng)基滅菌后F₀值為6.968min，F(xiàn)₀≤8min，未達(dá)到殘存概率法中要求的殺滅效果，這種培養(yǎng)基就不能使用了么？ 

最后，我們來解答一下培養(yǎng)基的滅菌效果是否必須用F₀值來評定？

其實(shí)大多培養(yǎng)基的滅菌工藝經(jīng)過計(jì)算轉(zhuǎn)化之后的F₀值都不能滿足≥8min的要求，但是依然可以繼續(xù)使用這樣的產(chǎn)品進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，我們從以下3個方面進(jìn)行分析：

1、《中國藥典》》<1421 滅菌法>中規(guī)定“本通則介紹的常用滅菌方法，可用于制劑、原料、輔料、醫(yī)療器械、藥品包裝材料以及設(shè)備表面等物品的滅菌，從而使物品殘存或微生物的概率下降至預(yù)期水平。”從此概念可以看出上述表格中F₀值主要應(yīng)用于無菌產(chǎn)品的滅菌保證，而采用煮沸除菌方式滅菌的培養(yǎng)基，為非無菌產(chǎn)品，不用關(guān)注F₀值。

2、當(dāng)培養(yǎng)基用于無菌產(chǎn)品檢測時，必須防止因培養(yǎng)基滅菌不徹底而導(dǎo)致產(chǎn)品出現(xiàn)假陽性結(jié)果的發(fā)生，此時需要結(jié)合培養(yǎng)基的微生物促生長性能和滅菌效果（如關(guān)注F₀是否≥8min或生物滅菌指示效果是否通過）同時判定。此時需要結(jié)合生物滅菌指示效果、無菌度試驗(yàn)和微生物促生長性能進(jìn)行判定。

3、當(dāng)培養(yǎng)基用于非無菌產(chǎn)品檢測時，如用于供試品的選擇性分離培養(yǎng)（如麥康凱瓊脂培養(yǎng)基）、生化鑒定（如三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基）等過程的培養(yǎng)基，只需要保證培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中不引入雜菌干擾，也就是平時說的空白對照結(jié)果正常，即可判定其滅菌滿足使用要求。

敲黑板：

1、 針對高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基應(yīng)依據(jù)其使用范圍確定其是否需要關(guān)注F₀值，但一定要保證培養(yǎng)基適用性（含無菌性）和供試品測試的陰性對照合格；

2、 針對煮沸滅菌和過濾除菌的培養(yǎng)基屬于非無菌產(chǎn)品，無需測定F₀值；

3、 高壓蒸汽滅菌過程需定期使用適宜的生物指示劑進(jìn)行驗(yàn)證；

4、 無論采用何種方式滅菌的培養(yǎng)基均需用無菌試驗(yàn)和促生長實(shí)驗(yàn)進(jìn)行性能驗(yàn)證。

陸橋公司可提供相應(yīng)的生物指示劑產(chǎn)品：

參考文獻(xiàn)

1、《中國藥典》（2025年版）

2、國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證管理中心 中國制藥設(shè)備工程協(xié)會 《濕熱滅菌指南》